细胞生物学实验汇总范文

近半个世纪以来,以分子生物学和细胞生物学为代表的生物学相关学科的发展突飞猛进,并向生物医学多个学科进行广泛渗透和交叉融合,对传统的生物学和医学科学均产生了革命性的影响,极大地推动了人类健康领域的理论突破和技术创新。目前,分子与细胞的相关知识已经成为生命科学的共同语言。按照现代医学对于人体认知的“社会–人体–系统–器官–组织–细胞–分子”这一逐级探索模式,分子与细胞是最为基本和最为核心的层次。因此,作为一名现代医学生,掌握扎实的分子与细胞基本理论知识对于理解或阐明疾病的发病机制、理解/执行或创建疾病的诊断和治疗方案至关重要。近年来,国内外各高等医学院校纷纷对已有的基础医学和临床医学课程,在器官系统层次上进行课程和知识整合,这已成为目前西方医学教育的主流模式。国内多个医学院校也纷纷学习、引进、改良和开展了“以器官系统为中心”的教学体系,取得了良好的效果。然而,在分子与细胞层次上的相关课程整合,主要涉及《生物化学》《、分子生物学》《、细胞生物学》和《医学遗传学》四门密切相关的生物学主干课程的整合。国内各医学院校虽有探索,但基于国内外医学教育在生物学相关课程教学上存在较大的差异(西方医学生进入医学院前学过较多的生物学课程,但国内医学生则从高中直接入学),故而目前在上述四门课程的整合上尚无一个成熟的模式。根据笔者前期调研掌握的国内医学院校的情况来看,中国医科大学和华中科技大学同济医学院对生物学学科相关课程整合进行了有益的探索,这两所学校均将《生物化学》、《细胞生物学》和《分子生物学》三门课程的内容进行重组整合,还分别出版了专门的教材《医学分子细胞生物学》和《细胞的化学与生物学》[6-7]。此外,中国医科大学和上海交通大学医学院还尝试将《医学遗传学》与《组织胚胎学》两门课程进行整合[8]。通过调研和梳理,笔者发现,上述国内医学院校的生物学相关课程整合中存在一个关键问题,即《医学遗传学》的相关内容在课程整合中没有与相关生物课程进行较好的融合。众所周知,《医学遗传学》在早期发展阶段,与胚胎发育研究密切相关,但经过近年来的快速发展,其整体内容已迥异于传统的经典遗传学和胚胎发育研究,反而与《生物化学》、《细胞生物学》,尤其是《分子生物学》的联系更为密切。因此,《医学遗传学》更应该与《生物化学》等生物学主干课程进行系统、合理的整合;而《组织胚胎学》则适合以器官系统为主线,与其他医学类课程进行整合。然而,对包括《医学遗传学》在内的这四门密切相关的生物学主干课程进行系统整合的做法尚未见报道,很有必要进行尝试和探索[6-9]。

2分子与细胞整合课程教学体系的构建

2.1整合思路与教学内容

2012年初,作为我校启动的“以器官系统为中心”重大教学体系改革的一部分,我们在充分调研的基础上,以分子和细胞为主线,将传统以学科设置的《生物化学》、《分子生物学》、《细胞生物学》和《医学遗传学》四门课程进行有机精简整合,形成了一门新的整合课程《分子与细胞》[10-12]。如表1所示,整合后的新课程的教学内容包含“生物大分子结构与功能”等八个层层递进的知识模块,按照由“动”至“静”,由“分子”至“细胞”,由“简单”至“综合”的原理进行设置。整合后的内容更为合理,更符合学习认知规律。结合教学实施,全部教学内容又分为两大部分,依次分为两个阶段进行教学。第一阶段,即《分子与细胞I》,为基础阶段:主要讲解分子与细胞相关的基础知识,该部分内容是将原有四门课程的核心基本知识进行重新精简整合为生物大分子结构与功能、细胞的结构与功能、物质代谢及调控、遗传信息传递及调控和细胞的运行机制五个密切关联并层层递进的模块。本阶段的主要教学目标是使学生掌握分子与细胞相关的基本理论知识,能够在分子和细胞水平上理解生命活动的基本规律,并尝试初步运用这些知识分析和理解相关的医学问题。实验教学方面,主要设置基本实验,包括双缩脲法测定血清蛋白质含量、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳、胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用、血糖浓度的测定、转氨基作用(纸层析)、转氨酶活性的测定、DNA/RNA的原位显示及细胞膜通透性观察、线粒体活体染色及细胞器的观察、酸性蛋白/碱性蛋白及过氧化物酶的原位显示共计10个实验项目,以培养学生的基本实验技能和思维能力。第二阶段,即《分子与细胞II》,为提升阶段,主要将原有四门课程中的前沿进展性内容、医学相关内容如基因工程、分子生物学技术、基因诊断与基因治疗、干细胞、细胞工程、医学遗传学等内容进行整合,分为分子与细胞操作专题、医学遗传学专题和专题综合讨论三部分。本阶段的主要教学目标是,在第一阶段的基础上,使学生了解和掌握一些重要的分子细胞生物学技术及其应用、分子医学研究前沿与进展,并重点培养学生初步具备运用分子与细胞相关知识分析和解决相关医学问题的能力,为后续课程学习奠定坚实的基础。实验教学方面,包括人类皮肤纹理的观察与分析、人类染色体非显带核型分析和人类染色体G显带核型分析三个经典验证实验,另外设置一个基因克隆综合大实验,以培养学生综合性思考和解决问题能力。与原有的四门课程相比,新的整合课程重点解决了如下四个问题。首先,该整合课程很好地解决了前述的《医学遗传学》与其他三门生物学课程的系统整合问题。其次,该整合课程很好地解决和避免了原有四门课程中一些教学内容重复讲授的问题,如细胞信号转导、遗传信息传递与调控、癌基因与抑癌基因等,新整合课程教学学时数也比原四门课程总学时数减少了12个学时。再次,该整合课程将原有四门课程中一些密切相关交叉内容进行有机融合,以专题形式讲授。譬如,将原《医学遗传学》中的“肿瘤遗传”、原《分子生物学》中的“癌基因和抑癌基因”、《细胞生物学》中的“细胞周期与肿瘤”等内容进行整合,合并为分子肿瘤学专题讨论式教学;还将原《医学遗传学》中的“生化遗传病”与原《生物化学》中的代谢病、分子病等相关内容进行整合,合并为分子与疾病专题讨论式教学。最后,该课程整合是在分子与细胞层次上,与所在单位的在器官系统层次上的基础医学与临床医学课程整合紧密配合,实现了整个医学院校生物医学课程的系统整合。譬如,将原有《生物化学》课程中的“肝的生物化学”和“血液生物化学”章节分别调整入后续器官系统整合课程中的“消化系统”和“血液系统”教学单元。针对上述整合后的教学内容,教学团队编写了教学大纲和一个简明的教学讲义。在实际教学过程中,教师和学生主要以自编的教学大纲和教学讲义开展教学和学习,同时辅助参考整合前的三本教材《生物化学与分子生物学》、《医学细胞生物学》和《医学遗传学》[10-12]。

2.2教学方法与手段

在教学模式上,由“以教师为中心”转变为“以学生为中心”。除了采用常用的多媒体教学、网络辅助教学等教学方法与手段外,我们重点采用小组讨论式教学。在小组讨论式教学具体实施过程中,我们确保每20个学时进行一次小组讨论式教学。具体实施方案为:首先,教师提前根据教学内容设计病例讨论(如糖尿病病例、镰刀状红细胞贫血病例)或相关生物医学讨论主题与问题(如蛋白质分子结构与功能的辩证关系、基因突变对蛋白质结构与功能的影响等),将全班(35~40人)随机分为5~8组(每组5~8人),布置讨论任务;然后,学生以小组为单位,查找资料,相互讨论分析,最后形成书面报告,并以PPT形式口头汇报,口头汇报时各组之间相互提问讨论;最后,教师根据小组书面报告、口头汇报和讨论参与度等对学生打分,组内学生也根据贡献、参与度等互相打分。与传统的教师灌输式讲授教学相比,小组讨论式教学可显著提高学生的参与度和主动性,使学生由传统的“被动式学习”转变为“主动式学习”,也很好地培养了学生的合作交流沟通、查阅资料、口头表达以及运用所学知识分析和解决相关医学问题的能力。

2.3课程考核和成绩评定

改变单一的期末集中一次性终结考试的方法,采取形成性评价与总结性评价相结合,加强全程性考核,将课程考核贯穿到课程教学的全过程,充分调动学生学习的积极性、主动性和创造性。坚持知识、素质和能力协调发展的原则,引导学生从以知识学习为主向知识、能力、素质并重的方向转变,增强学生自主学习和分析问题、解决问题的能力。在具体实施中,考核分为形成性评价和总结性评价两部分,总分为100分,形成性评价和总结性评价各占50%。综合考虑形成性评价指标的合理性、客观性和可操作性,经过多次修改调整后的评价方案参见表2。

2.4教学团队与管理

在生物学一级学科层次上跨科室组建的教学团队,主要由来自生物化学与分子生物学教研室、细胞生物学与遗传学教研室的资深和年轻优秀教师组成,实行多学科跨科室联组教学。团队管理采用课程负责人制,同时设立教学秘书,协助处理教学相关具体事务。在每学期开学前、期中和期末,均组织一次集体备课和教学讨论会,通过集体备课讨论的方式,对授课方案、授课过程中出现的问题、学期末考核具体方案、学期教学经验总结等方面进行讨论总结,从而保证教学质量。

3实施效果与存在问题

细胞生物学实验汇总范文

【关键词】阻塞性黄疸；,bax；,bcl

【Abstract】AIM：ToexploretheprotectivemechanismofPanaxnotoginoside(PNS)againsthepaticinjuryafterobstructivejaundice(OJ)inrabbits.METHODS：FortyeighthealthyJapanesewhiterabbitswererandomizedinto2groups,24ineachgroup:groupAtreatedwithcommonbileductligation(BDL),groupBofBDL+PNS.Allanimalswerekeptunderthesamecondition.ImmunohistochemistrywasusedtodeterminetheexpressionsofBaxandBcl2inhepatictissues.RESULTS：IngroupA,expressionsofbcl2andbaxinthehepatictissuewereobservedafterOJ.Expressionofbaxreachedthepeakatthe9thdayafterOJ,thentendedtodecline.Similarly,thehighestexpressionofbcl2wasobservedatthe21thdayafterOJ.Theapoptosisindex(AI)increasedwiththeincreaseofbaxexpressionbutdecreasedwithbcl2strongexpression.AftertreatmentwithPNSingroupB,alowerexpressionofbaxandahigherexpressionofbcl2werefound,andtheAIvaluewasalsolower,comparedwithgroupA.CONCLUSION：ThepathologyofOJmayberelatedtotheinitiationofapoptosis.PNSmayplayaprotectiveroleagainsthepaticinjuryafterOJ,whichmayberealizedthroughupregulatingtheexpressionofbcl2anddownregulatingtheexpressionofbaxinthehepatictissues.

【Keywords】obstructivejaundice;bax;bcl2;Panaxnotoginoside;liver;rabbits

【摘要】目的：探讨梗阻性黄疸肝损伤中的病理调控机制及三七总皂甙(PNS)的保护.方法：健康日本大耳白兔48只，雌雄各半，随机分为2组，每组24只.A组：胆总管接扎组（BDL）；B组：BDL+PNS组.建立实验动物模型.所有实验动物均在相同条件下饲养.采用免疫组化法检测肝组织bax，bcl2的表达情况.结果：A组动物在胆道梗阻后，肝组织可见bcl2和bax蛋白表达，bax蛋白在梗阻9d达高峰，此后开始下降.而bcl2蛋白在梗阻21d达高峰.凋亡指数（AI）随bax升高而升高，随bcl2的升高而降低；B组动物bax表达较同时相A组弱，而bcl2蛋白强于A组，B组AI值较A组降低.结论：梗阻性黄疸所致的肝组织病理变化可能与凋亡程序的启动有关.PNS对梗阻性黄疸肝组织损伤有明显的保护作用,其机制可能是与上调肝组织bcl2蛋白及下调bax蛋白有关.

【关键词】阻塞性黄疸；bax；bcl2；三七总皂甙；肝；兔

0引言

梗阻性黄疸是外科的常见病症，肝脏是最先受损并损伤最重的器官.本实验我们通过检测梗阻性黄疸大耳白兔肝组织bax，bcl2蛋白在不同时期的表达情况，同时给予三七总皂甙（Panaxnotoginoside,PNS）干预，探讨梗阻性黄疸肝损伤的病理调控机制及药物保护.

1材料和方法

1.1材料日本大耳白兔72只，体质量1.8~2.5kg，雌雄各半，兰州生物制品研究所提供.bax,bcl2免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司.PNS由山西三九万荣药业有限责任公司提供，批号20020628.

1.2方法

1.2.1分组将48只日本大耳白兔，雌雄各半，随机分为2组，每组24只.A组：胆总管接扎组（BDL）；B组：BDL+PNS组.分别于术后3，6，9，21d每组随机取6只处死取材.

1.2.2模型制作①BDL组：20g/L戊巴比妥钠(40mg/kg,ip)麻醉，距胆总管起始部位1cm处双重结扎.②BDL+PNS组：自胆总管结扎术日起腹腔注射PNS25mg/kg，1次/d，至取材.

1.2.3观察指标及检测方法①肝组织的病理变化：剪取肝右叶组织约5mm×5mm×4mm大小，置于40g/L多聚甲醛固定，然后脱水、透明、浸蜡、包埋，制成4μm厚的石蜡片，HE染色，显微镜观察病理变化.②肝功能检测：分别于术后3，6，9，21d将各组大耳白兔取材，自下腔静脉取血3.0mL，4℃，3000r/min离心10min后取上层血清测定谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、血清白蛋白（ALB）.③bax，bcl2的免疫组化检测:先剖腹剪取肝右叶组织,约5mm×5mm×4mm大小，置于40g/L多聚甲醛固定24h，后依次进行脱水、透明、浸蜡、包埋，然后切成4μm厚的石蜡片，贴片后行免疫组化染色.染色操作步骤：抗生物素链酶亲合素复合物法（SABC）.切片脱蜡至水，30mL/LH2O2处理，微波Ⅱ挡修复抗原20min滴加正常山羊血清10min，滴加一抗，湿盒内4℃孵育20h，0.01mol/LPBS洗2×3次，滴加生物素兔化山羊抗兔IgG37℃孵育20min，0.01mol/LPBS洗2×3次，滴加SABC复合物37℃孵育20min，0.01mol/LPBS洗5×4次，DAB显色，镜下控制反应时间，双蒸水终止反应，苏木素轻度复染，脱水、透明、封片、显微镜观察.结果判断和数据处理采用网格测试法.细胞质出现棕黄色颗粒为染色阳性细胞，染色结果综合染色强度及阳性细胞数量两个方面进行半定量分析，分别评分0～3分.染色强度：阴性（0分）；浅黄色（1分）；棕黄色（2分）；棕褐色（3分）.阳性细胞数计分：无着色细胞（0分）；阳性细胞数≤1/3（1分）；1/3～2/3(2分)；大于2/3(3分).根据两项结果相加分数判断结果：0分（-）；2分（±）；3分（+）；4分(）；5分(）.每例切片观察5个高倍（×400）视野（向同一方向移动切片，不重复，不重叠）作为观察区，分别计数每个视野中的阴性与阳性细胞数，最后计算阳性百分率，即AI，AI=阳性细胞数/（阳性细胞数+阴性细胞数）.

统计学处理：所有实验数据用SPSS8.0软件进行统计学处理，结果以x±s表示.组间观测指标随时相变化比较采用重复测量数据的方差分析，检验水准α=0.05.

2结果

2.1术后一般状况及取材时肉眼观察A组实验动物于胆总管结扎手术后12h出现尿色加深，术后2d出现皮肤及巩膜黄染，大便颜色变浅，随梗阻时间延长，食欲及精神减退，反应逐渐迟钝，皮肤及巩膜黄染进一步加重.取材时见肝脏明显增大，边缘变钝，颜色逐渐由暗红转变为棕黄色，质地由软变硬.术后21d取材时见有腹水，肝脏表面呈结节样改变.B组皮肤巩膜黄染较轻，发生时间较晚；肝脏表面结节较小量少.

2.2光镜下形态学改变A组动物于胆总管接扎3d即见肝细胞轻度水肿，肝内胆管扩张，汇管区炎性细胞浸润，可见少量细胞凋亡，表现为肝细胞嗜酸性变，细胞质浓缩，核染色质向核仁或核周边聚集；结扎6d，肝细胞轻至中度水肿，纤维组织增生，胆小管扩张及中度增生，胆栓形成，汇管区炎性细胞浸润增多，细胞凋亡增加；结扎9d，肝细胞中度水肿，部分细胞脂肪变性，可见再生的肝细胞，汇管区胶原结缔组织明显增生并向肝小叶内扩展，细胞凋亡达到高峰，可见嗜酸性小体（图1A）；结扎21d，肝脏结构广泛改变，细胞凋亡有所减少，肝假小叶形成，肝索变窄，肝窦增宽，大部分肝细胞胞质浓缩，部分肝细胞变性坏死.B组与同时期A组比较，肝细胞凋亡、炎性细胞浸润及肝纤维化程度均较轻（图1B）.

A:胆总管结扎9d;B:胆总管结扎+注射三七总皂甙9d.

图1大耳白兔肝组织形态学改变HE×400

2.3肝功能的变化A组和B组的血清TBIL和ALT随胆道梗阻的时间延长而逐渐升高，而白蛋白逐渐下降.B组与A组ALT比较明显降低（P<0.05,表1）.

2.4各组肝组织bax，bcl2的表达及与AI的关系胆道结扎后，肝脏可见bcl2和bax蛋白表达.表达最多的是肝实质细胞胞质，枯否细胞和内皮细胞也有表达.bax蛋白于结扎3d即有表达，结扎9d达高峰，此后开始下降.而bcl2蛋白在梗阻21d表达最明显.AI于结扎3d开始升高，随bax的表达增强而上升，于结扎9d达高峰，此后随bcl2的表达增强而下降，于21d降至最低.PNS干预组的大耳白兔肝组织bax蛋白较同时相单纯结扎组明显下调，bcl2蛋白较同时相单纯结扎组上调，凋亡指数较低（表2,3）.表1术后各组血清TBIL,ALT及ALB含量变化表2各组肝组织bax，bcl2表达评分表3各组肝组织AI值

3讨论

bax和bcl2基因是目前最受关注的与细胞凋亡相关的基因，通过转基因动物和基因转染实验研究发现，bcl2对细胞凋亡具有明显的抑制作用，而bax拮抗bcl2，促进细胞凋亡［1］.本实验提示bcl2和bax可能多以二聚体的形式调控肝细胞凋亡.胆道梗阻9d前bax同二聚体的数量增多，从而促进细胞凋亡，AI值较高；而9d后bcl2增多，促进形成bcl2/bax异二聚体，并使bcl2同二聚体的量增多，从而抑制细胞凋亡，AI值降低.梗阻性黄疸肝损伤发生细胞凋亡的可能机制为：①钙超载.梗阻性黄疸时肝细胞内胆汁酸含量明显上升，肝细胞内线粒体受损，使肝细胞内氧化磷酸化产能减少，导致了肝细胞生物膜损伤、钙泵功能丧失，胞内Ca2+升高，触发细胞凋亡.②氧自由基致损伤.胆道梗阻后肝脏氧自由基增多，氧自由基能够导致DNA、蛋白质、脂膜的氧化损伤，从而导致细胞凋亡［2］.氧自由基增多的原因一是肝脏有效血流量明显减少，缺氧导致线粒体呼吸链电子传递障碍，结果产生大量氧自由基；二是自由基清除酶系在体内合成减少，自由基清除能力下降；三是胆盐阻碍线粒体呼吸链的电子传递，增加电子外泄率，促进氧自由基的形成［3］.③炎性细胞浸润.胆道梗阻后，由于肠道胆盐缺乏，清除内毒素的能力下降，大量内毒素吸收入血，形成肠源性内毒素血症，内毒素具有刺激单核细胞产生TNFα等的作用.而肝细胞功能受损，对TNFα等细胞因子灭活能力下降，使这些细胞因子在血液及组织中持续升高［4］.TNF可能通过激活细胞Ca2＋～Mg2＋依赖的限制性核酸内切酶，导致基因组DNA分子降解为寡聚核苷酸片段，引发细胞凋亡［5-6］.

PNS主要包含人参二醇型皂甙Rb1、人参三醇型皂甙Rg1和三七皂甙R1.实验研究证实PNS是一种选择性的慢钙通道阻滞剂，它能减少自由基的产生和清除已产生的自由基，对心、肝、肾缺血性再灌注损伤中有明显的保护作用［7］；PNS有肝保护和抗肝纤维化作用［8］.另外，它还有抗炎作用.李晓辉等［9］报道PNS具有良好抗炎活性，其机制与抑制炎性细胞因子TNF及NO水平的升高有密切关系,发现胆总管结扎后随着胆红素水平的逐渐升高，肝脏病理损伤加重，肝脏合成蛋白的能力下降，表现为ALT的值升高，ALB的下降.但是PNS干预组的大耳白兔肝组织病理损害较同时期未干预组轻，ALT较低，ALB较高，而且其bax蛋白较同时相单纯结扎组大耳兔明显下调，bcl2蛋白较同时相单纯结扎组上调，AI值较同时相单纯结扎组降低,说明PNS对梗阻性黄疸肝细胞的凋亡有抑制作用,其原因可能为①PNS作为一种钙通道阻滞剂，能阻滞细胞内钙超载，进而减少凋亡的启动，使肝细胞凋亡减少;②自由基是一种凋亡刺激因子，PNS能减少自由基的产生和清除已产生的自由基，从而减少肝细胞凋亡的发生;③PNS可能通过其抗炎作用减轻内毒素血症和细菌移位对肝细胞等的损害，从而减少凋亡的启动.

我们推测，PNS可能通过抑制肝细胞的凋亡来发挥其保护作用，其机制可能是与上调肝组织bcl2蛋白及下调肝组织bax蛋白有关.

【参考文献】

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细胞生物学实验汇总范文篇3

关键词：植物细胞工程；项目责任制；综合实验

植物细胞工程以植物细胞全能性为理论基础，是研究离体条件下植物细胞脱分化和再分化条件的应用性课程，是一门偏重于实验技能操作及应用的课程，是许多综合性大学生物类专业的必修课。武汉生物工程学院植物细胞工程实验室已成立20年，通过多年教学实践和探索，在植物细胞工程综合实验实行了“项目责任制”的教学模式探索与改革，从教学内容、教学方法、教学形式、考核评价体系等多方面进行了实践，取得了比较理想的教学效果。

一、教学内容

“植物细胞工程综合实验”以“植物细胞工程实验”为前期基础。后者以验证性实验为主，实验材料以烟草、薄荷、康乃馨等作物为主，主要实验内容为：基础培养基母液的配置，银杏、康乃馨、烟草等具体培养基的配置、分装和灭菌，无菌接种（芽丛诱导，生根诱导，增殖诱导等），实验现象的观察与记录等，主要目的是让学生学会植物细胞工程的基本知识和基本技能。

而植物细胞工程综合实验，则以“项目责任制”为实验教学模式，重视实验的连贯性和学生的综合应用能力，旨在培养和提高学生的主动性和创新能力。本模式是将实验以课题项目的形式分配给学生，学生以小组为单位完成。学生要全程负责项目的实施，包括实验前的准备工作（实验材料的准备、试剂、药品的配制分装，仪器设备的调试、使用），实验课上的教学讲授和答疑，实验结束后的报告批阅、成绩评定和实验总结等环节。课堂的自完全交给学生，指导教师只起引导和指导的作用。实验内容主要有以下两个特点：拓宽了实验材料，除了传统的模式作物，还增加了金线莲、铁皮石斛、白芨、马铃薯等作物，提高了学生的积极性；丰富了培养形式，除了传统的快速繁殖，还增加了作物水培和开放式培养的摸索，开阔了学生的眼界。

二、教学方法和形式

项目责任制的教学是以学生为主体、教师为主导，改变了过去被动接受和模仿教师设计好的实验流程的现象。学生的学习积极性很高，是一种主动的学习状态；学习效果理想，学生在实验过程中，不仅实验动手能力得到了很好的强化，而且分析问题和解决问题的能力也得到了很好的锻炼和提高。

项目责任制的实验具体流程是：

第一次课，教师向学生介绍讲解实验教学模式和要求，根据班级人数分组，一般为3～4组，每组4～6人，每组承担1个自选课题项目。每个小组选出组长1人，组长负责本组成员的分工协调。学生自由选择课题，教师将项目的相关资料提供给学生参考，并给予一定的指导意见，学生课下进行相关课题的文献查询和实验设计，并于第二次课进行汇报沟通。

第二次课，每组组长汇报实验方案，以板书的形式授课，每组学生必须将实验技术路线、实验结果参考指标、预期结果、创新点或兴趣点明确讲出。其他组学生进行聆听和提问，以更好地进行实验设计的完善。教师要肯定其努力和优点，并及时进行引导。因为学生都是第一次设计实验，在梯度设计、变量选择、结果指标等方面易出现问题。

第三次至第五次课，每组选出一名学生讲授当天内容。之后主要进行培养基配制、无菌接种、实验现象的观察等教学。在每次课程中，如果出现了与预期不同的现象，鼓励学生积极讨论，查阅文献解决问题，还可以进行组间的交叉讨论，以利于学生交流讨论。

第六至七次课，将穿行论文阅读、实验数据处理、照片处理等内容，并在第七次课进行实验论文提纲的撰写和基本内容的梳理，以翻转课堂的形式为主。

第八次课，进行论文最后的润色和小组答辩。

三、考核评价体系

客观公正和真实有效的考核评价体系，不仅能够提高学生对实验的重视程度，也能促进学生探索知识的积极性。我们采用的考核形式是综合性的，学生成绩由平时成绩和项目成绩组成。平时成绩占60%，包括每位学生课前预习报告、课中实验操作和态度，小组任务完成情况，组内成员的配合和问题发现和解决情况，组间成员的沟通。如果学生在实验中有创新理念，将给予加分。项目成绩占40%，包括小组的论文完成质量、小组的答辩水平、组间的互评与教师评定。

参考文献：

[1]张小红，徐虹，邵景侠.植物细胞工程实验课程改革[J].实验室科学，2010，13（6）：37-38.