化学品测试方法范文篇1

关键词：微生物；检测；免疫学

目前我国微生物检验方法基本上还是采用传统的微生物的培养方法,通常经过增殖培养、分离纯化、生化试验、血清学试验等，检验步骤繁琐、耗时长，不能应对市场需求快速准确检验方法的要求[1]。近年来，随着生物技术的快速发展，微生物快速方法融合了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面的知识对微生物进行分离、检测、鉴定和计数,与传统方法比较,更快、更方便、更灵敏[2]。本文就国内外的微生物检测技术应用和研究状况综述如下。

1快速生化检测方法

1.1快速测试片法快速测试片法[3]可视为预制型培养基系统，它以纸片、胶片或无纺布等作为培养基载体，将预制的培养基和指示剂附着在载体上面，微生物若有在上面生长，可以方便的判读、测定。

其优点有：①操作简单，方便快捷，省去微生物检验前后大量的工作量，如配培养基，消毒灭菌，清洗培养皿；②体积小，便于携带，存放，可以节省实验室空间，放入培养箱时，可以10片或20片堆放，节省培养箱空间；③加入了染色剂，显色剂，增强了效果，菌落总数和金黄色葡萄球菌的检测中，跟传统法相比能够更加容易的判读，而且避免传统法中，用热琼脂倾注时，琼脂温度控制不当，对细菌造成的热损伤；④与传统检测方法的相关性非常好，两者的差异性很小。在菌落总数的测试时，我实验室对两者进行比对，测试片法跟平板法的计数结果无明显差异。

其缺点有：①标准上：虽然通过了AOAC,ISO，我国出入境检验检疫等世界各国权威组织机构的认证认可，进入相关标准，但没有进入我国强制的食品安全国家标准，导致质检、国内企业对相关产品检验时无法采用，根本上限制了该技术的推广；②技术层面上：菌落总数测试片在做到某类产品，含有芽孢杆菌，测试片表面容易液化，影响判读结果。霉菌测试片上面酵母跟霉菌有时不大容易判断；③经济上：成本较高，对于平时人工比较富余的实验室来说，全部使用测试片经费上面压力较大。

1.2快速生化检测仪器法微生物生化快速检测是微生物检测发展的方向之一，其具有操作自动化、标准化、准确率高等特点。国内外现在已有很多全自动微生物分析系统问世[4]，如Vitek系统、Biolog系统、BAX系统和Phoenix细菌鉴定等。

Vitek系统[5]的原理是基于微生物的生化反应。它设计六种VITEK鉴定卡对应不同的菌群，然后在鉴定卡内封装相应的风干底物，将待检菌经传统培养，划线分离得到的纯菌落制成菌悬液后，注入鉴定卡,放入仪器进行检测。仪器则通过光学组件，按不同的波长对鉴定卡进行扫描，根据微生物在对不同风干底物生长反应不同，得出相应的鉴定结果。

其优点有：①获得广泛的国际认可，而且也进入了最新食品安全国家标准，在实际检测中可以作为细菌检测的鉴定判断依据；②准确，用vitek对已经标准菌株进行验证，结果跟实际菌株完全符合，而且时间上面大大缩短，一般情况常见菌株5～8h都能鉴定出结果；③快捷，减少手工操作时间，无需添加其它试剂；④将传统微生物生化鉴定需要的生化药品压缩到一张小卡片里，方便了实验室管理，避免了样品量不大的实验室需准备的繁杂的生化试剂，节约了成本。

2免疫学技术

全自动酶联荧光免疫系统即miniVIDAS。它主要是利用酶联免疫的原理，通过检测酶跟酶荧光底物作用产生荧光强度来计算物质浓度，从而对微生物或毒素等进行筛选检测。该系统含有固相吸附器和条形码标记试剂条，其内侧由抗体包被作为固相吸管功能，通过仪器自动进行地抽吸，而在吸头内表面完成抗原抗体结合反应、洗涤分离和荧光激发过程。

其优点有：①灵敏度高，可以作为大批量样品的筛查，能有效地节约检验时间和工作量；②速度快，一般上机后几十分钟可以得到初筛结果；③结果准确，与国标法比较无明显差异，假阳性跟假阴性率小。

其缺点有：①没有进入到食品安全国家标准，影响它在实际检测中的应用；②检测项目少，实际检测中常用到的项目只有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌毒素，单核增生李斯特菌；③耗材费用高，特别在样品量少的情况下。即使单做一个样品也需要3根测试条。影响了在中小实验室的应用。

3PCR技术

PCR是多聚酶链式反应的简称，该方法通过对人工难以培养的微生物相应DN段的扩增,检测扩增产物含量,从而快速地对食品中致病菌含量进行检测。实时定量PCR技术跟传统PCR技术其基本原理相同，但定量技术原理不同。实时定量技术应用了荧光染料和探针来保证扩增的特异性，并且荧光信号的强弱同扩增产物的量成正比，从而准确定量[7]。

其优点有：①测定结果迅速、灵敏度和特异性高、检测成本低，理论上,只

要样品中含有一分子待测菌的DNA,通过PCR技术完全可以在短时间内检测到；②已成为检测一些病毒、猪链球菌的国家标准方法(如禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法GB/T1943811-2004;H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法，GB/T1943812-2004，GB/T19915.7-2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法等)。

其缺点有：①其存在的最大问题在于PCR产品的假阳性污染，其原因主要是由于PCR方法的灵敏度极高,可能是扩增已死亡的待检测菌体而造成的；②没有进入食品安全国家标准，影响了该技术在国内检测的应用。

4结论

微生物检验技术正朝着简便、高效、快速、自动化方向发展，许多新的检测技术还在不断涌现出来，除了上面介绍的技术，还有代谢学技术、传感器技术、流式细胞术、基因探针技术、生物芯片技术等等。每种检测技术都有其优缺点，研究检测人员应该根据不同的检测目标，不同的实验环境及条件，选择适当的检测方法，进一步地，还可以将不同的技术结合起来比对、使用，以提高检测的准确性。

参考文献：

[1]龙夫.食品微生物快速检测技术动向[J].中外食品，2004，6：55-56.

[2]张志洁,韩剑众.食品微生物快速检测技术及其自动化研究进展[J].食品研究与开发,2003(2):97-100.

[3]吴清平,孙永,蔡芷荷,等.快速测试片在食品微生物检测中的应用[J].中国卫生检验杂志,2006,16(5):635-637.

[4]杨向莹,江志毅,杨娜.快速方法在食品微生物检测中的应用[J].中国食品工业,2006(5):49-50.

[5]杨毓环,陈伟伟.VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用[J].海峡预防医学杂志,2000,6(3):38-39.

化学品测试方法范文

关键词：污泥堆肥腐熟度评价方法

腐熟度(maturity)是衡量污泥堆肥成熟程度的参数。BrodieHerbertL[1]认为不应将污泥堆肥腐熟度和污泥堆肥质量相混淆，腐熟即指堆肥原料所含的能量和营养物质形成了稳定的腐殖质，而所谓腐熟度即堆肥完成度，即堆肥中的有机质经过矿化、腐殖化过程最后达到稳定的程度[2]。

污泥堆肥产品必须腐熟，若腐熟不完全就施于农田则易造成根部缺氧腐烂，并释放出有毒物质[3]，且增加土壤中某些重金属离子的溶解性[4]。当前国内深圳、无锡等地已建立了几家污泥堆肥厂，因此建立污泥堆肥腐熟度评价标准既是保证农田安全使用的需要，也是堆肥工艺改进、产品市场化的客观要求。

1单项检测参数

同济大学李国建探讨了堆肥过程中耗氧速率的基金顷目：上海市科学技术发晨基金重点项目测定，指出用耗氧速率容易区分开一次发酵期和二次发酵期，将其作为腐熟度指标具有定量化的优点[4]。堆肥腐熟度评价指标分为三类[5]：物理学指标、化学指标和生物学指标。物理学指标包括温度、气味、颜色；化学指标包括化学需氧量、挥发性固体含量、易降解有机质、腐殖质物质的变化、C／N等；生物学指标包括微生物活性测试和发芽试验。物理学指标易于定性描述堆肥过程所处的状态，因此可作为试验的经验判断，但用作评价则缺乏可比性，因此寻找合适的化学指标评价腐熟度是众多研究者所努力的方向之一，这方面的研究比较广泛深入。同时为了检验堆肥对植物的毒性，常用堆料中微生物活性的变化及对植物生长的影响来评价堆肥腐熟度，这就是所谓的生物学指标。

国外关于腐熟度的检测有一些商业检测方法，比较著名的有Solvita测试法[6]、Dewar自热测试法[7]。

Solvita测试法：该测试法由美国WoodsEnd研究实验室提出并申请了专利，已广泛应用了二十几年，有十三个国家采用了该方法，瑞典、丹麦、西班牙、挪威已经将该方法作为官方测试方法[2]。该测试方法以现代凝胶技术为基础，操作简易、快速，可在4h内得出结论。将样品放入密闭小杯中并防入一个信号器，该信号器能反映CO2的存在（通过颜色），对照颜色表可得出结论，颜色对照表从1（生堆料）到8（腐熟堆肥）变化，读数越大则腐熟程度越好。

Dewar自热测试法：基于最初欧洲的自热测试标准方法，由WoodsEnd实验室总结整理。先调节测试样品的水分，然后插入一支温度计，温度计距瓶底大约5cm。样品放入一个绝热真空瓶中，这样置于室温至少5d，但不超过10d，并测试每天的最高温度，其结果即为腐熟过程的最高升温。该方法的缺点是测试结果只能区分腐熟和不腐熟，时间较长，但比较直观，具有很强的操作性。测试结果分为I-V五个等级来评价。

此外还有其他测试方法，例如CO2探管测试法等。

2综合评价指标

由于单项评价参数难以准确评价污泥堆肥腐熟度，所以必须选择几项适当合理的测试参数综合评价污泥堆肥腐熟指标。中国农业大学李国学提出用化学和生物学参数相结合来评价堆肥腐熟度[8]；FrostDonnaIannotti[9]、LWu[10]等认为腐熟度的检测应该包括腐熟程度的检测和稳定程度的检测，腐熟程度的检测主要侧重于堆肥产品后续使用对植物的影响，如水芹植物毒性测试；稳定程度的检测则侧重于生物学性质和微生物活性，如耗氧速率。

2.1国内

污泥通过堆肥达到腐熟基本可消除有毒有害的有机物，稳定N、P营养元素，消除恶臭，消灭病原体[11]。我国还未制定准确的评价堆肥腐熟度的标准参数和方法，评价方法多参考《粪便无害化卫生标准》（GB7959-87），该标准主要从卫生学的角度来评价堆肥的腐熟程度，堆肥成熟的标志是物料呈黑褐色，无臭味，手感松散，颗粒均匀，蚊蝇不繁殖，病原菌、寄生虫卵、病毒以及植物种子均被杀灭[12]。显然这些指标感性较强，但较难定量，作为评价标准存在很大局限性，已不适应当前堆肥的研究和堆肥产品的市场化。

同济大学对污泥堆肥腐熟度的评价作了较多的研究，提出用模糊数学模型综合评价污泥堆肥的腐熟度。

2.2国外

国外关于腐熟度的评价更多是建立在以有机固体废弃物为原料的基础上的，其中包括畜禽粪便、城市垃圾、厨余、庭院废物及城市污泥。

在美国，将堆肥列人生物固体、肥料进行统一管理。污泥为农业利用占有相当比例。美国加利福尼亚州堆肥质量委员会(CCQC)是一个致力于制订统一的堆肥质量标准以促进堆肥产品的生产和使用的官方组织。该组织提出标准的制订原则：测试必须简易、快速、可靠且适合不同原料不同工艺的堆肥产品的评估。提出的评价标准为：堆肥试样首先必须满足C／N≤25，因为该值如过高则微生物就会争夺土壤中的氮，造成生长于土壤中的植物缺氮[13]；必须至少通过A组(包括CO2释放量及呼吸作用、氧气消耗、自热测试)一项测试和B组(包括NH4+-N／NO3--N、NH3浓度、挥发性有机酸浓度、种植测试)一项测试。

A组测试主要表征堆肥中有机物质的降解程度，B组测试则主要表征堆肥产物可能会对植物产生的毒性作用。CCQC在提出评价内容的同时，对A组和D组也提供了相应的测试方法，从而根据结果可以评判堆肥产品为三种标准：高度腐熟、腐熟、不腐熟，具体见表1、2。

表1A组腐熟度测试方法

Tab.1DeterminationmethodsformaturityofgroupA

测试方法德国、匈牙利、荷兰、英国等国或由国家机构或由堆肥行业协会，都制订了比较完备的堆肥产品质量标准，其中包括堆肥腐熟度[15]。

3结语

①污泥堆肥化处理是污泥减量化、无害化、资源化的一种比较理想的污泥处理方法，堆肥腐熟度的评价已成为制约污泥堆肥技术发展的因素之一，建立堆肥腐熟度评价标准显得尤为重要。②腐熟度评价方法应简单、快速、准确、可靠且易于检测，应将其作为堆肥产品质量体系之一。③建议由国家环保局和农业部根据当前的技术发展和市场调查，参考国外标准研究制定适用标准，同时鼓励科研机构在试验的基础上提出科学简易的检测评价方法。

参考文献：

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[13]BrewerLindaJ，SullivanDanM．Aquicklookatquickstabilitytests[J]．BioCycleEmmaus，2001，(1)：75—78．

化学品测试方法范文

目的建立反相高效液相色谱法（RP－HPLC）测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量。方法环维黄杨星D与异氰酸苯酯反应后，用RP-HPLC测定，色谱柱为ODS-C18柱;流动相为甲醇－水(84∶16);检测波长：234nm。结果衍生化反应在23.03~53.73μg·ml-1浓度范围内线性良好，r=0.9998（n＝5），回收率均值96.1％，重复性好。结论该法准确，可靠，专属性强，可用于黄杨宁片中环维黄杨星D的质量控制。

【关键词】黄杨宁片环维黄杨星D异氰酸苯酯反相高效液相色谱法衍生作用

Abstract：ObjectiveTodevelopanRP-HPLCmethodforquantitativedeterminationofCyclovirobuxineDinHuangYangNingtablets.MethodsCyclovirobuxineDreactedwithaderivativereagentphenylisocyanateinchloroform.TheanalysiswascarriedoutonC18column，themobilephasewasmethanol-water(86∶14)，andthedetectionwavelengthwasat234nm.ResultsGoodlinearitywasobtainedfrom23.03μg·ml-1to53.73μg·ml-1ofcyclovirobuxineDderivativeswithacorrelationcoefficientof0.9998.Theaveragerecoverywas96.1%，RSD=1.5%.ConclusionThemethodisaccurate，reliableandspecificandcanbeusedforthequalitycontrolofHuangyangningtablets.

Keywords：HuangyangningTablets;CyclovirobuxineD;Phenylisocyanate;RP-HPLC;Derivatization

黄杨宁片中主要成分为环维黄杨星D，环维黄杨星D系从黄杨科植物小叶黄杨BuxusminrophllaSieb.etZucc.var.SincaRehd.etWils.及其同属植物中提取精制所得，主要用于冠心病及心绞痛的治疗。由于本品系从植物中经多次提取制备，原料中含有一定量的结构相似生物碱，《中国药典》原料用非水滴定法，片剂用酸性染料比色法，测定的均为总生物碱，专属性差。根据其结构含仲氨基的特点，本文用异氰酸苯酯为衍生化［1］试剂，用高效液相紫外检测器方法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量，现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器岛津UV-2401紫外可见分光光度计；Agilent1100高效液相色谱仪系统，包括四元泵系统，紫外检测器，色谱数据化学工作站。

1.2制剂及对照品环维黄杨星D对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110888-200202；黄杨宁片，江苏苏中药业集团股份有限公司生产（规格：1mg/片；批号060404，060406，060407），衍生化试剂异氰酸苯酯为AcrosOrganics，Belguim产品，色谱用水为蒸馏水，甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱为岛津ODSC18柱(150mm×4.6mm)；流动相为甲醇-水(84∶16)；流速1.0ml/min；检测波长234nm；柱温为室温；进样量20μl。

2.2测定方法

2.2.1衍生化试剂的配制精密吸取异氰酸苯酯20μl，置10ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2对照品溶液的制备取环维黄杨星D对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品20片精密称定，研成细粉，精密称取适量（约相当于环维黄杨星D10mg），置具塞锥形瓶中，加0.5％冰醋酸溶液40ml，50℃加热超声（250W，40kHz）2h，取出，放冷，离心6min（3000r/min），小心倾取上清液，残渣加适量0.5％冰醋酸溶液充分洗涤，离心6min（3000r/min），合并上清液及洗液，用氨水调pH值至9.0，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷50ml振摇2min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷层，用三氯甲烷湿润的试纸滤入圆底烧瓶中，再用三氯甲烷萃取3次（40，30，30ml），分取三氯甲烷层，依次滤入烧瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入烧瓶中，回收三氯甲烷至适量，转移至25ml量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

2.2.5测定波长的选择取对照品衍生化后，在200～400nm波长范围内扫描，可见本品在230～240nm波长范围内有较大吸收，且差异不大；最终采用234nm作为本品含量测定的检测波长。

2.3线性范围测定精密称取环维黄杨星D对照品10mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.6，0.8，1.0，1.2，1.4ml，置10ml量瓶中，各加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取上述供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，测定线性范围，结果本品线性方程为：A=94.933C+52.419，r=0.9998（n＝5）。表明环维黄杨星D在23.03～53.73μg·ml-1的浓度范围内，样品浓度（C）与峰面积（A）呈良好的线性关系。

2.4重复性实验称取同一批号样品6份，照上述供试品溶液制备的方法制备6份，按上述色谱方法分别测定含量，结果RSD＝1.9％，重复性良好。

2.5中间精密度取黄杨宁片，照上述供试液的制备方法，由3人，分3d，分别在不同仪器上测定同一批样品含量，结果RSD＝1.5％，精密度良好。

2.6稳定性实验精密吸取上述供试品溶液20μl，分别于0，1，2，4，6，24h时精密吸取溶液20μl，按上述色谱方法测定含量，结果RSD＝0.5％，供试品溶液在24h内稳定。

2.7加样回收率实验精密称取同一批已知含量的黄杨宁片样品5份适量，分别加入等量的环维黄杨星D对照品，按供试品溶液制备方法制样，照上述色谱方法测定含量，根据加入量和回收量计算回收率。结果见表1。

表1黄杨宁片加样回收率实验结果（略）

结果表明：此方法回收率良好，符合测试要求。

2.83批样品含量测定结果取3批样品，分别按上述供试品溶液制备方法制备，照上述色谱方法测定含量，结果见表2。

表23批样品含量测定结果（略）

3讨论

3.1衍生化反应条件的选择在实验过程中，对衍生化试剂用量、反应时间、反应温度进行了考察。结果表明衍生化试剂用量在0.15ml以后，峰面积不再增加；反应30min后，峰面积也不再增加，反应温度基本无影响，故最终选择加入0.2ml衍生化试剂，于室温反应30min，作为衍生化反应的条件。

3.2黄杨宁片供试品溶液处理方法筛选根据本品环维黄杨星D溶解度项下，及本品原料提取工艺，通过实际试验，选择多种方法提取环维黄杨星D，结果表明，直接用甲醇或氯仿提取效率较低，而采用0.5％冰醋酸水溶液加热超声提取，然后用氨水调节pH值，用三氯甲烷多次萃取，效果较好。结合本品回收率实验，精密度实验，本法能满足本品含量测定要求。

本高效液相色谱法方法学研究表明，采用柱前衍生化方法，用紫外检测器即能准确测定本品含量，方法可靠，专属性强，便于控制质量。本品比色法含量测定结果和高效液相色谱法测定结果相差较大，结合本品原料含量测定结果可见，由于本品原料中含有一定量的结构相似生物碱，用非水滴定法含量达100.1％，而液相法测定含量仅为81.6％，可见本品非水滴定法不能完全反应本品原料中环维黄杨星D（C26H46N2O）的真实含量；而本品片剂采用酸性染料［2］比色法，测定的也为总生物碱，专属性不强，导致测定结果也不能反映环维黄杨星D的真实含量。

【参考文献】